استخلاص وتنقيـة وتوصـيف وربط ببسـين الاغنام
Abstract
هدفت الدراسة الحالية الى استخلاص انزيم الببسين EC:3.4.23.1 من معدة الاغنام وتنقيته ودراسة بعض صفاته وربطه، استخلص الانزيم باستعمال خمسة محاليل استخلاص لغرض تحديد افضل محلول استخلاص وقد اوضحت نتائج الدراسة ان محلول كلوريد الصوديوم 6% الحاوي على 2% حامض البوريك هو افضل محلول استخلاص حيث اعطى اعلى فعالية نوعية للانزيم والتـي بلغـت 14.3 وحدة/ملغم .ركـز المحتـوى البروتيني للمسـتخلص الانزيمي الخام باستخدام كبريتات الامـونيـوم بنسـبة اشـباع تراوحـت بيـن 30-70% ، ثم اجريت عملية الديلزة باستعمال الماء المقطر، اكملت خطـوات تنقية ببسـين الاغنام باسـتخدام عمود كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE- Sephadex A-50 ثم الترشيح الهلامي على عمود Sephadex G-100 وبلغت عدد مرات التنقية 27.64 مرة وبحصيلة 18.4%. بينت نتائج الكشـف عن نقـاوة ببسين الاغنام وجود حزمة بروتينية واحدة للانزيم عند الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الاكريل امايد تحت ظروف غير ماسخة بغياب مادة SDS . وكـان الـوزن الجزيئي لببسـين الاغنـام 33700 دالـتون عنـد تقـديره بطريقـة الترحيـل الكهربائي في هلام الاكريل امايد المتعدد بوجـود مـادة SDS. تم ربـط ببسـين الاغنـام النقي بالاكـار بتركيز 3%،وبلغـت الفعالية المتبقيـة لببسـين الاغنـام المرتبـط بالاكار 25% بعـد استخدامه 7 مرات ،وبلغـت الفعالية المتبقيـة لببسـين الاغنام المرتبـط بالاكار22% عند خزنه لفتـرة 60 يوم على درجة حرارة 4 م . وجد ان الرقم الهيدروجيني الامثل للفعالية التحللية لببسين الاغنام الحر والمرتبط هو 2 ، بينما اعطـى الرقـم الهيدروجيني 5.8 اعلى فعالية تخثرية لببسـين الاغنام الحـر والمرتبـط وان الفعالية التخثرية تقل مع ارتفاع الرقم الهيدروجيني من 5.8 الى7 ،ووجـد ان الرقم الهيدروجيني الامثل لثبات ببسـين الاغنام الحرهو 2 وان الانزيم الحر والمرتبط فقدا فعاليتهما عند الارقام الهيدروجينية القاعدية 8 و9 . كانت درجة الحرارة المثلى للفعالية التحللية لببسين الاغنام الحر 35م والمرتبط 45م ، بيـنما كانـت درجة الحـرارة المثلى للفعالية التخثريـة لببسـين الاغنـام الحـر والمرتبـط هي 35م. وكانت درجة الحرارة المثلى لثبات ببسين الاغنام الحر والمرتبط تتراوح بين 15-35م وان ببسين الاغنام النقي الحر والمرتبط فقد فعاليته بالكامل عند 75م و85 م على التوالي .بلغت طاقة التنشيط لفعالية ببسين الاغنام الحر والمرتبط 8.13 كيلو سعره. مول-1، 10.79 كيلو سعره. مول-1 على التوالي.
Downloads
Downloads
Published
How to Cite
Issue
Section
License
Kufa Journal for Agricultural Sciences is licensed under the Creative Commons Attribution 4.0 International License, which allows users to copy, to create extracts, abstracts and new works from the Article, to alter and revise the Article, and to make commercial use of the Article (including reuse and/or resale of the Article by commercial entities), provided the user gives appropriate credit (with a link to the formal publication through the relevant DOI), provides a link to the license, indicates if changes were made and the licensor is not represented as endorsing the use made of the work. The authors hold the copyright for their published work on KJAS website, while KJAS responsible for appreciate citation for their work, which is released under CC-BY-4.0 enabling the unrestricted use, distribution, and reproduction of an article in any medium, provided that the original work is properly cited.
